УДК 579.864
Омельченко С.О., Ржевская В.С.

Изучение антагонистической активности микробиологического консорциума Эмпробио в отношении Salmonella Tiphomurium 144

У статті наведені матеріали про антагоністичну активність пробіотическої консорціума «Емпробіо» по відношенню к Salmonella tiphomurium 144.
Ключові слова: «Емпробіо», антагоністична активність, Salmonella tiphomurium.

В статье представлены материалы об антагонистическую активность пробиотического консорциума «Эмпробио» по отношению к Salmonella tiphomurium 144.
Ключевые слова: «Эмпробио», антагонистическая активность, Salmonella tiphomurium.

This article presents material on the antagonistic activity of probiotic consorcium «Emprobio» in relation to Salmonella tiphomurium 144.
Key words: «Emprobio» antagonistic activity, Salmonella tiphomuriumIn materials of article about.

В птицеводстве и животноводстве происходит интенсивное накопление микрофлоры, как в помещениях, так и в окружающей среде. Длительное использование антибиотиков широкого спектра действия в больших дозах может привести к развитию резистентности к антибиотикам условно-патогенной микрофлоры. Скорость приспособления бактерий к антибиотикам намного превышает скорость создания антибиотиков, поэтому, часто антибиотикотерапия не эффективна при лечении заболеваний, как у птиц и животных, так и у людей.

Одним из перспективных направлений в этой области стало применение пробиотиков. Пробиотики - микробные препараты, представляющие собой культуры микроорганизмов, обладающих антагонистической активностью по отношению к патогенной микрофлоре. По эффективности действия пробиотики не уступают некоторым антибиотикам и химиотерапевтическим средствам. К тому же они не оказывают губительного действия на микрофлору пищеварительного тракта, не загрязняют продукты животноводства и окружающей среды, то есть являются экологически чистыми. Использование пробиотиков безопасно для людей, потребляющих животноводческую продукцию. Пробиотики могут не только нормализовать качественный и количественный состав кишечной микрофлоры после использования антибактериальных средств, но во многих случаях они могут быть единственным эффективным методом лечения, профилактики и стимулирования продуктивности сельскохозяйственных животных и птиц (1).

Одним из основных компонентов пробиотических препаратов чаще всего являются бактерии рода Lactobacillus (2). Несмотря на несомненные успехи, достигнутые при изучении пробиотических микроорганизмов, в частности, молочнокислых бактерий, многое до сих пор остается неясным. Отсутствие стандартных методов исследования пробиотиков затрудняет сравнительный анализ различных штаммов молочнокислых бактерий. В связи с этим разработка методологии сравнительного исследования пробиотических культур являются актуальной проблемой современной микробиологии (3).

При исследовании антагонистической активности в качестве тест – культуры используют условно – патогенные микроорганизмы. Сальмонелла в естественных условиях являются возбудителями септических инфекций, поражений ЖКТ, пневмоний, абортов у животных. (4.) Основной источник сальмонеллезов – домашние животные (крупный и мелкий рогатый скот, свиньи и др.), грызуны и птицы. Реже источниками заболевания являются люди. Основной путь передачи инфекции – пищевой. Факторами передачи могут быть мясо, молоко, яйца животных и птиц. Наиболее восприимчивы к заболеванию люди со сниженным иммунным статусом (в том числе грудные дети) и больные, получающие антибиотики. (5)

Сальмонеллы долго сохраняют жизнеспособность во внешней среде - при комнатной температуре сальмонеллы выживают несколько месяцев. Исходя из вышесказанного, целью нашей работы является изучение антагонистической активности пробиотической ассоциации «Эмпробио» по отношению к Salmonella tiphomurium различными методами.
Материалы и методы. Материалом исследования являлись пробиотический консорциум молочнокислых бактерий «Эмпробио»: Lactobacillus acidophilus 317/402, Lactobacillus plantarum 20, Lactobacillus casei 6, Streptococcus lactis 2/4 и дрожжей: Saccharomyces cerevisiae 75. В качестве тестового микроорганизма использовали эталонный штамм Salmonella tiphomurium 144.

Тестовый микроорганизм использовали в следующих вариантах:

1. суточную культуру Salmonella tiphomurium 144, выращенную на МПА, без разведений;
2. суточную культуру Salmonella tiphomurium 144, выращенную на питательном бульоне, без разведений (18 млрд. клеток в 1 см3 взвеси)
3. 1 млрд. клеток S. tiphomurium 144 в 1 см3.

Жидкий пробиотический консорциум микроорганизмов культивировали при 37º С в течение 3 суток, блоки пробиотической композиции получали на среде МRS, внесением жидких культур глубинным методом (10 млн. кл в 1 см3). Термостатировали при 37º С в течение суток.

Исследования антагонистической активности пробиотического консорциума проводили методом агаровых блоков (глубинным и поверхностным), штаммов молочнокислых бактерий исследовали методом агаровых блоков глубинным способом (7). Количество инокулируемой S. tiphomurium 144 – 1,5 млрд. кл в 1 мл., концентрация штаммов молочнокислых бактерий – по 10 млн. кл.

Поверхностный метод. 0,1 мл взвеси S. tiphomurium 144 равномерно высевали в чашки Петри на поверхность агаровой пластинки со средой МПА. Из агаровой пластинки вырезали симметрично расположенные лунки диаметром 10 мм.

Глубинный метод применяли в двух вариантах. В первом варианте 1 см3 иннокулята смешивали с нагретым и вновь охлажденным до 50°С агаром и затем разливали в чашки Петри. Во втором случае дополнительно 0,5 мл взвеси S. tiphomurium наносили на застывшую агаровую пластинку и стерильным шпателем распределяли по ее поверхности.

Из агаровых пластинок полученных поверхностным и глубинным методами вырезали симметрично расположенные диски диаметром 10 мм, в отверстия вносили 4-6 симметрично расположенных блоков МRS с глубинно выращенным пробиотическим консорциумом микроорганизмов.

После внесения блоков в лунки, часть чашек помещали на экспозицию при 5 °С на 5 часов. Вторую часть исследуемых чашек Петри сразу после посева помещали в термостат. Все чашки термостатировали при температуре 37°С 18-24 часа, до появления на поверхности среды сплошного слоя колоний, на следующие сутки измеряли диаметр зоны задержки роста S. tiphomurium 144 в мм.

Отзывы: