Материалы и методы исследований

Материалом исследования служили растения земляники (Fragaria ananassa), пораженные бактериальной инфекцией и микробиологические препарат Эмбико для борьбы с грибковыми и бактериальными заболеваниями сельскохозяйственных культур.

Для выделения фитопатогенных микроорганизмов листья клубники очищали от внешних источников инфекции в растворе хозяйственного мыла в течение 2-5 минут, затем тщательно промывали водой, высушивали. Стерильным скальпелем вырезали участок поврежденной ткани и помещали его в каплю физиологического раствора в чашке Петри. Листья измельчали с помощью стеклянной палочки и оставляли на 10 минут. Суспензию высевали на твердые неселективные питательные среды NA и Кинг В.

Антагонистическую активность молочнокислых бактерий и микробиологического препарата Эмбико изучали методом агаровых блоков, глубинным способом. 1 мл каждого штамма молочнокислых бактерий и препарата Эмбико вносили в стерильную чашку Петри и смешивали с нагретой и вновь охлажденной до 45°С средой МRS, тщательно размешивали и термостатировали при 37 ºС 24 часа. Суточные культуры фитопатогенных микроорганизмов вносили в чашки Петри смешивали с нагретой и вновь охлажденным до 45°С питательной средой Кинг В, тщательно размешивали. После застывания среды вырезали 4-6 лунок, в которые вставляли блоки МRS с глубинно выращенными молочнокислыми бактериями и Эмбико, вырезанные тем же пробочным сверлом.

После внесения блоков в лунки, чашки Петри помещали на экспозицию при 5 °С на 5 часов для диффузии метаболитов микроорганизмов Эмбико в агаровую пластинку. Затем чашки Петри термостатировали при температуре 37 °С 18-24 часа, до появления на поверхности среды сплошного роста колоний, на следующие сутки измеряли диаметр зоны задержки роста фитопатогенных микроорганизмов в мм.

Способность мацерировать растительную ткань проверяли на клубнях картофеля. Поверхность промытых и высушенных клуней картофеля стерилизовали 70 % этанолом и стерильным пробочным сверлом нарезали диски растительных тканей диаметром 1 см и толщиной 3-5 мм, которые помещают в чашки Петри на увлажненные фильтры или на поверхность 1,5 % агар-агара. На каждый диск накапывают суточные культуры каждого штамма по отдельности и вместе двух штаммов. Чашки термостатировали 3 суток при 25 °С. Наличие или отсутствие мацерации определяли визуально и при прикосновении к дискам бактериологической петлей.

Для проведения реакция гиперчуствительности исследуемые бактериальные штаммы инкубировали на скошенном агаре в течение 24 ч. Клетки смывали с помощью 3-4 мл физиологического раствора и вводили с помощью стерильного шприца в мякоть листа. Также, с помощью стерильного шпателя растению были нанесены многочисленные порезы, на которые наносили капли исследуемых фитопатогенов. В качестве контроля использовали введение стерильного физиологического раствора.

Земляника садовая имела поражения в виде некрозов (пятнистостей) на листьях, характерных для бактериозов (рис. 1), но выявить возбудителей (по анализу симптомов заболевания не удалось).

Рис. 1.    Листья земляники садовой (Fragaria ananassa) c некротическими поражениями.

В результате проведенных исследований из пораженной ткани было выделено 2 микроорганизма.  Культурально - морфологические характеристики выделенных штаммов представлены в таблице 1, микроскопирование культур - рис.1.

Отзывы: