Ржевская В.С.
Таврический национальный университет им. В.И. Вернадского, Симферополь, Украина
Омельченко С.О.
ГП «Крымстандартметрология», Симферополь, Украина

Изучение антагонистической активности ветпрепарата «Эмпробио» по отношению к условно-патогенным микроорганизмам 

В статье описано методика исследования антагонистической активности ветпрепарата «Эмпробио» методом агаровых блоков при глубинном культивировании. Представлены материалы об антагонистической активности ветпрепарата «Эмпробио» по отношению к условно – патогенным микроорганизмам: кишечная палочка, сальмонелла, шигелла, протей, листерия, стафилококк.

The article describes the technique to study the antagonistic activity of Veterinary preparation "Emprobio" method agar blocks at deep cultivation. The materials of the antagonistic activity of Veterinary preparation "Emprobio" to the conditional - pathogenic microorganisms: Escherichia coli, Salmonella, Shigella, Proteus, Listeria, Staphylococcus.

Современное птицеводство и животноводство развиваются очень быстро и те показатели продуктивности, которые казались пределом возможности 10 лет назад, сегодня достигнуты в большинстве хозяйств. Доказано, что интенсивная технология выращивания животных приводит к накоплению и активизации условно-патогенной микрофлоры, а также искажению процессов формирования кишечного микробиотопа у новорожденных (4). Нормальная кишечная микрофлора молодняка играет исключительно важную роль в поддержании ес¬тественной резистентности организма птицы или животного. В случае утраты или снижения этой функции он заселяется патогенными и условно-патогенными микроорганизмами (3).

В отличие от домашних сородичей у животных промышленного выращивания существенно снижен общий индекс кишечной микрофлоры. Состав кишечного микробиотопа молодняка характеризуется присутствием анаэробных спорообразующих бактерий, стафилококков, сальмонелл, протея, плесневых и дрожжеподобных грибов (1).

Применение антибиотиков приводит к подавлению не только патогенной, но и облигатной микрофлоры, в следствии чего возникает дисбактериоз, а также появляются антибиотикорезистентные штаммы условно - патогенных микроорганизмов.

Профилактику и лечение болезней, вызванных условно-патогенными и патогенными микроорганизмами необходимо проводить, стимулируя естественную резистентность организма. Одним из перспективных направлений в этой области стало применение пробиотиков. Пробиотики - микробные препараты, представляющие собой культуры микроорганизмов, обладающих антагонистической активностью по отношению к патогенной микрофлоре. Ценность этих препаратов в том, что они безопасны для окружающей среды, животных, птиц, человека. Также они способствуют развитию полезной микрофлоры не только в желудочно-кишечном тракте животных и птиц, но и в почве. Пробиотики характеризуются нулевым сроком ожидания, т.е. реализацию товарной продукции можно осуществлять непосредственно после применения. К пробиотикам не происходит привыкание, они безвредны в концентрациях, многократно превышающих рекомендуемые нормы (2).

Материалом исследования служил ветпрепарат «Эмпробио» – ветпрепарат, включающий молочнокислые гомоферментативные стрептобактерии (Lactobacillus), молочнокислые гомоферментативные стрептококки (Streptococcus) и одноклеточные грибы Saccharomyces, а также дополнительные компоненты для усиления лечебно-профилактического эффекта – флавоноиды растительного происхождения. Флавоноиды подавляют патогенные микроорганизмы, но не влияют на аборигенную микрофлору, у патогенных микроорганизмов не вырабатывается устойчивости к ним.

Композиция микроорганизмов «Эмпробио» нормально функционирует при рН=3,0-3,5, что позволяет бактериальным клеткам пройти через верхние разделы желудочно-кишечного тракта и достигнуть кишечника в количестве достаточном для достижения терапевтического эффекта. Фенолоустойчивость молочнокислых бактерий «Эмпробио» составляет 0,4-0,6%, спиртоустойчивость – 14-16%, что позволяет им хорошо приживаться в кишечнике птиц и животных на длительный срок и продолжать функционировать даже после окончания приема ветпрепарата. Микроорганизмы «Эмпробио» выделяют ряд жизненно важных аминокислот, ферментов, витаминов группы В, С, фолиевую кислоту и др. Применение «Эмпробио» позволяет улучшить усвоение железа, кальция и других микроэлементов, нормализует уровень гемоглобина и обменные процессы в организме, способствует выработке интерферона, повышает устойчивость организма к инфекционным, токсическим и другим агентам, обладает адаптогенным эффектом (снятие стрессов при скученном содержании, повышенной температуре, при переходе на другие рационы кормов) (6).

В качестве тестовых микроорганизмов использовали эталонные штаммы Escherichia coli O 55, Escherichia coli M 17, Shigella sonnei 233169, Shigella flexneri 232046, Proteus vulgaris 160209, Listeria monocitogenes 5105, Staphylococcus aureus 25923.

1 см3 (10 млн. кл.) ветпрепарата «Эмпробио» вносили в стерильную чашку Петри и смешивали с нагретой и вновь охлажденной до 50°С средой МRS, тщательно размешивали и термостатировали при 37 ºС 24 часа. Исследования антагонистической активности ветпрепарата проводили методом агаровых блоков, глубинным способом (5).

Взвеси тест - культур (из расчета 1 мл 1 млрд. взвеси на 100 мл среды) вносили в расплавленный и вновь охлажденный до 45°С питательный агар, тщательно перемешивали круговыми движениями и разливали в чашки Петри по 20 мл, усановленные на горизонтальном столе. После застывания среды вырезали 4-6 лунок, в которые вставляли блоки МRS с глубинно выращенным пробиотиком, вырезанные тем же сверлом.

После внесения блоков в лунки, чашки Петри помещали в холодильник при 5 °С на 5 часов для преддиффузии. Затем чашки Петри термостатировали при температуре 37 °С 18-24 часа, до появления на поверхности среды сплошного роста колоний, на следующие сутки измеряли диаметр зоны задержки роста тест - культур в мм.

Эмпробио» по отношению к условно-патогенным микроорганизмам" />

Таблица 1. Антагонистическая активность ветпрепарата «Эмпробио» по отношению к условно-патогенным микроорганизмам

Наименование культур	Зона задержки роста тест - культур 1 млрд. взвеси, мм
E. coli O 55	27±0,3
E. coli M 17	29±0,9
S. sonnei 233169	31±0,6
S. flexneri 232046	32±0,6
P. vulgaris160209	27±0,5
L. monocitogenes5105	28±0,5
St. aureus25923	27±0,4

Результаты исследованийпоказывают, что ветпрепрат «Эмпробио» обладает различной антагонистической активностью по отношению к разным штаммам условно - патогенных микроорганизмов (Р<0,01) (табл. 1). Диаметр задержки роста исследуемых тест - культур, под влиянием ветпрепарата, находится в пределах 27-32 мм. В меньшей степени антагонизм пробиотика отмечен по отношению к St. aureus25923 (27±0,4 мм) (рис. 1 а), P. vulgaris 160209 (27±0,5 мм) (рис. 1 б) и одному штамму кишечной палочки - E. coliO 55 (27±0,3 мм) (рис. 1 в). В большей степени ветпрепарат подавляет L. monocitogenes 5105 (28±0,5 мм) (рис. 1 г) и второй исследуемый штамм кишечной палочки - E. coliM 17 (29±0,9 мм) (рис. 1 д). Максимальная антагонистическая активность «Эмпробио» наблюдалась в отношении S. sonnei233169 (31±0,6 мм) (рис. 1 е) и S. flexneri232046 (32±0,6 мм) (рис. 1 ж).

        а                      б                   в                      г                    д                     е                    ж

Рис. Антагонистическая активность ветпрепарата «Эмпробио» по отношению к условно-патогенным микроорганизмам: а - St. aureus25923, б - P. vulgaris160209, в - E. coliO 55, г - L. monocitogenes 5105, д - E. coliM 17, е - S. sonnei 233169, ж - S. flexneri 232046.

Таким образом, результаты наших исследований показывают, что ветпрепарат «Эмпробио» обладает высокой активностью ко всем исследованным штаммам условно-патогенных микроорганизмов, что дает возможность рекомендовать этот ветпрепарат для использования в животноводстве и птицеводстве.

Литература

1.    ПанинА.Н., МаликН.И. Пробиотики — неотъемлемый компонент рационального кормления животных // Ветеринария, № 7, -2006 год.

2.    Альпейсов Ш., Ахметжанов Д.,Едыгенов А.  Микробиологические препараты в рационах молодняка // Птицеводство. - 2009. - N 10. - С. 51-52.

3.    Пилипейко В.Г., Мындря А.Г Антибиотикочувствительность возбудителей кишечных инфекций сельскохозяйственной птицы // Сучасне птахівництво, -2010, № 6. - С.11

4.    И.А.Лебедева. Кормление цыплят-бройлеров с использованием пробиотиков // "Аграрный вестник Урала" №12, -2009. - С. 63-64.

5.    Ржевская В.С. Перспективы применения пробиотиков в птицеводстве и животноводстве / Ржевская В.С., Теплицкая Л. М. // Сборник научных трудов по материалам VII международной научно - практической конференции «Современные вопросы науки ХХI век» (29 марта 2011 г.) – Тамбов: Издательство ТОИПКРО, 2011. - Выпуск VII, часть 3, С. 111-114.

6.    Омельченко С.О., Ржевская В.С Изучение антагонистической активности микробиологического консорциума «Эмпробио» в отношении SALMONELLA TIPHOMURIUM 144 // Ученые записки Крымского инженерно-педагогического университета, - Симферополь: Крымский инженерно-педагогический университет 2011. –Сер. «Биологические науки».- 2011.- Вып. 31. –С. 38-41.

Отзывы: